细胞生物学
PCR扩增技术
发布时间: 2011-05-06   浏览次数: 80

多聚酶链反应(PCR)技术的原理类似于DNA的天然复制过程。可简述为:

在微量离心管中加入适量缓冲液,加入微量模板DNA,四种脱氧核苷酸(dNTP),和耐热Taq聚合酶及两个合成的DNA引物,并有Mg2+存在。

加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链解链,这是所谓变性阶段。

降低溶液温度,使合成引物在低温(56℃)与模板DNA互补退火形成部分双链,这是所谓退火阶段。

溶液反应温度升至中温(72℃),在Taq酶作用下,以四种dNTP为原料,引物为复制起点,模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链,这是延伸阶段。

如此反复,在同一反应体系中可重复高温变性、低温复性和DNA合成这一循环,使产物DNA重复合成,并且在重复过程中,前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成,使产物DNA的量按2n方式扩增。经过25~35个循环,DNA扩增倍数可达106~109。